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細(xì)胞鋪板不勻的解決方法有哪些?

 更新時間:2024-02-19 點擊量:1119

細(xì)胞接種鋪板作為體外藥理實驗中最基本的技能,是實驗成敗的關(guān)鍵因素。鋪板不勻又是科研實驗中通往成功道路的一大障礙,細(xì)胞聚集導(dǎo)致的接觸抑制現(xiàn)象使實驗數(shù)據(jù)的可信度大打折扣。本片文章將會介紹細(xì)胞鋪板不勻的解決方法有哪些?一起來跟小編漲知識吧!

對于96孔板,每孔通常加入100μL細(xì)胞懸液。加樣方式為傾斜槍頭,從孔的左邊靠近底部緩慢加入(加樣過快同樣容易導(dǎo)致細(xì)胞聚集)。筆者建議,每加完半拉板子時,把細(xì)胞重新混勻,繼續(xù)加樣。加樣結(jié)束后,鏡下觀察如有局部不均勻現(xiàn)象,可以采取敲擊法,具體操作如下:將板子置于臺面上,左手持住板子的左邊,右手輕輕敲擊板子的右邊緣(5-8次),力度太強或次數(shù)太多會反而更易導(dǎo)致細(xì)胞聚集。將板子順時針旋轉(zhuǎn),依次敲擊剩余三個邊(據(jù)說逆時針效果不好),靜置約5-10分鐘后,放入37℃培養(yǎng)箱。

對于6孔板、12孔板或24孔板,為防止表面張力導(dǎo)致的中間液面太低細(xì)胞聚集的現(xiàn)象。通常每孔首先滴加少量培基,輕輕晃動浸潤整個孔底以保證板子的孔底都是濕潤的,這樣加液后細(xì)胞懸液會平鋪在整個孔底,可以避免加在中間位置和加在周邊晃勻后周邊細(xì)胞局部太多的現(xiàn)象,細(xì)胞分散會較均勻。注意加完細(xì)胞懸液后要放工作臺靜置一下(5-10分鐘)。鏡下觀察細(xì)胞均勻度,如不均勻可采用以下8字法、十字法及震蕩法等方法進(jìn)行細(xì)胞均勻度處理。具體操作如下:

 方法一(8字法):這種方法也是大家最常見的細(xì)胞搖勻方法。橫向8字搖勻法參考下圖,搖動次數(shù)根據(jù)鏡下觀察和個人力度具體分析(參考:保證液體不被晃動出去,8字晃動5次理論上就可以基本晃勻)。搖勻結(jié)束,切忌在鏡下移動觀察視野太久,以免伴隨著輕微的移動,細(xì)胞又往中間聚集。

方法二(十字法): 細(xì)胞鋪完板后,在水平方向上,上下左右四個方向進(jìn)行移動,呈十字形狀,重復(fù)5-6次。有些同學(xué)覺得十字法搖勻效果并不好,方法關(guān)鍵的是搖完后最好直接放入培養(yǎng)箱中,不要再做過多的移動(也有同學(xué)建議可以在培養(yǎng)箱中搖勻)。另外,同樣不建議放到鏡下長時間去觀察。

方法三(十字類似法):細(xì)胞鋪完板后,放在水平板面上先上下移動,再左右移動,每個方向5-6次。其他具體操作同十字法。

方法四(震蕩法):細(xì)胞懸液加完后,將細(xì)胞培養(yǎng)板抬高,對著燈光,從底部往上看,看細(xì)胞有沒有抱團(tuán)。然后從底部敲擊,使之分散。如果實驗室有平板振蕩器的話,我建議用這個儀器稍振蕩一下,效果不錯,就是振幅小,頻率高的那種。(個人不太推薦這種方法,板子接觸振蕩器后增加了染菌的風(fēng)險,而且轉(zhuǎn)速的調(diào)節(jié)和時間的掌握比較困難)。
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