一、GoldBio熒光素原液（GLSS）的制備

1.在分子生物學(xué)級(jí)H2O中制備15 mg/mL（100X）GLSS。

a.為了獲得最佳結(jié)果，應(yīng)立即使用GLSS，但可能會(huì)將其分離分成小份，在-80°C下儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)1個(gè)月。

2.螢光素酶發(fā)光中螢光素底物GLSS的最終濃度

含量測(cè)定應(yīng)為：150μg/ml（熒光素-K為471μM，熒光素Na為468μM）。

二、GoldBio螢光素酶測(cè)定緩沖液（TMCA）的制備

在合并到TMCA中之前，將所有試劑作為分子級(jí)H2O中的儲(chǔ)備溶液進(jìn)行制備。

1.準(zhǔn)備一份500mM的MgCl2（100x）溶液。

a.稱取476.05 mg（95.21 g/mol）MgCl2并溶解在10 ml H2O中。

b.溶液可儲(chǔ)存在RT。

2.制備25mM CoA（100x）溶液。

a.稱取191.88 mg（767.53 g/mol）CoA并溶解在10 ml H2O中。

b.通過(guò)過(guò)濾器抽取5-10 ml H2O，制備0.2µm過(guò)濾器。

c.通過(guò)預(yù)濕過(guò)濾器對(duì)100x CoA進(jìn)行滅菌，并在-20°c下儲(chǔ)存。

3.制備15mM ATP（100x）溶液。

a.稱取82.67 mg（551.14 g/mol）ATP并溶解在10 ml H2O中。

b.在-20°C下儲(chǔ)存。

4.制備400mM Tris-HCl，pH 7.8（4x）緩沖液。

a.稱取4.85 g（121.14 g/mol）Tris堿并溶解在85 ml H2O中。

b.用1M HCl調(diào)節(jié)pH至pH 7.8，并用H2O將體積調(diào)至100 ml。

5.在室溫下準(zhǔn)備新鮮的2倍TMCA原料。

a.計(jì)算實(shí)驗(yàn)所需的TMCA；將所有組件合并為2倍

工作濃度（在H2O中）（隨后在熒光素酶測(cè)定中降低到1x）。

示例：對(duì)于1 ml TMCA（2x）：500µl Tris-HCl（4x原液）20µl MgCl2（100倍庫(kù)存） 20µl CoA（100倍庫(kù)存）

20µl ATP（100倍庫(kù)存）用H2O將體積調(diào)至1 ml。

b.如有必要，您可以在此時(shí)加入其他成分（即DTT、EDTA）。

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